+7 (499) 686-58-88
125424, Россия Москва,
ул. Летная, 99А, стр 3

Нейтрализующие антитела у больных рассеянным склерозом, еженедельно внутримышечно принимающих препарат «Avonex» («Авонекс») и его биоподобный препарат интерферон бета-1а («CinnoVex» («СинноВекс»))

назад к просмотру объектов

Описание

 

 

Содержание доступно на «SciVerse ScienceDirect» («СайВерс СайенсДайрект»)

«Journal of Immunological Methods»

главная страница журнала: www.elsevier.com/locate/jim

 

Научная статья

Нейтрализующие антитела у больных рассеянным склерозом, еженедельно внутримышечно принимающих препарат «Avonex» («Авонекс») и его биоподобный препарат интерферон бета-1а («CinnoVex» («СинноВекс»)): Сравнительный анализ результатов измерений в двух разных лабораториях

Мухаммед Амир Шакарами a, Беруз Вазири b, Шива Салами c, Али Амини Харанди d, Джоель Огер e,*[1]

a Координатор исследования, Исфаханский университет медицинских наук, г. Исфахан, Иран

b Отдел химии белка, Биотехнологический исследовательский центр, Институт Пастера в Иране, Иран

c Совместная исследовательская группа препарата «CinnoVex», г. Тегеран, Иран

d Отделение неврологии, Университет медицинских наук им. Шахида Бехешти, г. Тегеран, Иран

e Лаборатория нейро-иммунологии, Университет Британской Колумбии, г. Ванкувер, Канада

ИНФОРМАЦИЯ О СТАТЬЕ

РЕФЕРАТ

Данные статьи:

Получена 5 июля 2012 г.

Получена в пересмотренной формулировке 12 ноября 2012 г.

Принята 28 ноября 2012 г.

Доступна в режиме он-лайн с 6 декабря 2012 г.

 

Появление нейтрализующих антител (НАа) имеет значительные клинические и регуляторные последствия для интерферонов у больных рассеянным склерозом (РС). 84 больных рецидивирующе-ремиттирующим рассеянным склерозом были включены в двойное слепое рандомизированное клиническое исследование, период которого длился 24 месяца. Больные были выборочно разделены на две группы, они еженедельно получали внутримышечные инъекции по 30 мкг либо препарата «Avonex®» (компания «Biogen Idec» («Биоген Идек»), США; 42 больных), либо препарата «CinnoVex®» (компания «CinnaGen Co» («СиннаГен Ко»), Иран; 42 больных). Каждые 6 месяцев для всех больных вычислялся и анализировался посредством проведения анализа цитопатического эффекта (ЦПЭ) титр НАа в г. Тегеран, Иран. Чтобы валидизировать измерения, сделанные в иранской лаборатории, 45 сывороток соответствующего объема и с надлежащими условиями хранения были выбраны и высланы на повторную проверку посредством использования метода анализа люциферазы гена-репортера (АЛ) для проверки в 2 фазы в г. Ванкувер, Канада. Точка среза 20 ед.ТР (трансдукции) рассматривалась на получение положительных результатов. Две лаборатории обнаружили положительные результаты по одним и тем же трем пробам (2 пробы, взятые у больных, получающих препарат «Avonex» и 1 – у больных получающих препарат «CinnoVex»), а остальные 42 пробы были негативные. Были получены следующие значения посредством использования формулы Кавада согласно рекомендациям международных стандартов; 2 238, 89 и 302 (ед.ТР/мл), используя анализ ЦПЭ в сравнении с 2 464, 290 и 169 (ед.ТР/мл), используя АЛ анализ. В нашем исследовании были получены подобные результаты от препаратов «CinnoVex» или «Avonex», предполагается, что оба лекарственные средства будут иметь аналогичные иммуногенетические профили.

© 2012 «Эльзевир Б.В.» Все права защищены.

Ключевые слова:

Рассеянный склероз

Интерферон бета

Нейтрализующие антитела

Цитопатический эффект

Люцифераза

 

  1. 1.     Введение

Интерферон бета является терапией первой линии для больных рецидивирующе-ремиттирующим рассеянным склерозом (РРРС) (Компстон и Коулз, 2002 г.). Интерферон бета-1а производится посредством использования рекомбинантной ДНК-технологии в овариальной клетке китайского хомячка (Джейкобс и соавт., 1996 г.). Повышение нейтрализующих антител (НАа) к рекомбинантным белкам является серьезной проблемой биотерапии (Шеллекенс, 2002 г.). Существует множество исследований на определение антител к биологическим:

были описаны, как связывающие, так и нейтрализующие антитела, анализы, опирающиеся на нейтрализацию целевых молекул, более привлекательны, поскольку они должны связываться с активными эпитопами. Для измерения антител, нейтрализующих интерферон, можно руководствоваться как вызыванием ингибирования цитопатического эффекта, так и анализом люциферазы гена-репортера (Боз и соавт., 2007 г.; Файлс и соавт., 1998 г.; Пунгор и соавт., 1998). Антивирусная активность интерферона бета измеряется посредством проведения анализа цитопатического эффекта (ЦПЭ), который определяет степень защиты линии клеток от разрушения

внедренным вирусом (Гроссберг и соавт., 2001 г.). При анализе люциферазы гена-репортера используется люминисцентный сигнал из линии клеток HL 116, содержащих плазмид, удерживающий кДНК люциферазу, контролируемую предранним индуцируемым интерфероном промотором 6–16 (Узе и соавт., 1994 г.). Все данные исследования могут считаться чувствительными к очень низким титрам антител.

Препарат «CinnoVex®» является биоподобной формой интерферона бета-1а, изготовленного компанией «CinnaGen Co» (промышленная зона «SiminDasht» («СиминДашт»), г. Тегеран, Иран). В связи с тем, что возникновение НАа имеет значительные клинические и регуляторные последствия для интерферонов, вместе с измерением антител были сделаны измерения НАа у больных РРРС, принимающих препараты «Avonex» или «CinnoVex» во время двойного слепого рандомизированного исследования в 2 различных лабораториях, используя два разных метода.

 

1.1. Материалы и методы

1.1.1. Пробы

84 больных РРРС были включены в двойное слепое рандомизированное клиническое исследование, период которого длился 24 месяца. Они были набраны из всех клиник РС (рассеянного склероза) при трех главных медицинских университетах в г. Тегеран и г. Исфахан, Иран. Больные были выборочно разделены на две группы, они еженедельно получали внутримышечные инъекции либо препарата «Avonex®» (компания «Biogen Idec» («Биоген Идек»), США; 42 больных), либо препарата «CinnoVex®» (компания «CinnaGen Co» («СиннаГен Ко»), Иран; 42 больных). Ампулы как с «Avonex®», так и с «CinnoVex®», содержали 30 мкг лиофилизированного интерферона бета-1а и были одинаковы по форме и по способу введения.

Каждые 6 месяцев в Иране для всех больных вычислялся и анализировался титр НАа. Результаты анализа НАа на 6-м и 12-м месяце исследования были негативны. Однако, 2 пробы (1 проба от больных, принимающих «Avonex» и 1 проба от больных, принимающих «CinnoVex») на 18м месяце исследования и 3 пробы (2 пробы от больных, принимающих «Avonex» и 1 проба от больных, принимающих «CinnoVex») на 24-м месяце исследования показали положительный результат на наличие НАа.

Чтобы валидизировать измерения, сделанные в иранской лаборатории, 45 сывороток соответствующего объема и с надлежащими условиями хранения были выбраны и высланы на повторную проверку для верификации во 2-й фазе в Нейро-иммунологическую лабораторию, Центр исследования мозга, Университет Британской Колумбии, г. Ванкувер, Канада. Все пробы были взяты у пациентов, прошедших курс терапии в течение 24 месяцев (23 с «Avonex» и 22 с «CinnoVex»).

Остальные 42 НАа положительные пробы, взятые у пациентов, принимающих интерферон бета-1а (либо «Avonex®», либо «Rebif®» («Ребиф»)), были слепо отосланы из банка сыворотки РС УБК для анализа в Институте Пастера г. Тегеран и подсчета коэффициента корреляции «r».

 

1.1.2. Лабораторные методы

Для измерения титра НАа был использован анализ люциферазы гена-репортера (АЛ) в г. Ванкувер, а в г. Тегеран был использован анализ цитопатического эффекта (ЦПЭ). АЛ был проведен, как ранее было описано (Лэм и соавт., 2008 г.). Рекомендованный анализ ЦПЭ Всемирной организацией здравоохранения был использован в общем порядке (Антонелли и соавт., 1998 г.). При использовании обеих методов сигналы выше 20 ед.ТР/мл рассматривались как положительные. Положительные пробы были последовательно растворены и оттитрованы.

 

1.2. Результаты

1.2.1. Качественный анализ

Средняя продолжительность исследования 45 анализируемых проб из иранского испытания составляла приблизительно 24 месяца (среднее значение ± СО: 23,4 ± 1,7 месяца). Пробы

анализировались обоими методами, т.е., ЦПЭ в г. Тегеран и АЛ в г. Ванкувер с точкой среза 20 ед.ТР на получение положительных результатов. Согласно результатам, полученным двумя лабораториями, одни и те же три пробы были положительны (2 пробы, взятые у больных, получающих препарат «Avonex» и 1 – у больных получающих препарат «CinnoVex»), а 42 – отрицательны. Следующие значения посредством использования формулы Кавада в соответствии с рекомендациями международных стандартов были получены по 3 пробам, положительным согласно обеим методикам; 2 238,89 и 302 (ед.ТР/мл), используя анализ ЦПЭ в сравнении с 2 464,290 и 169 (ед.ТР/мл), используя АЛ метод.

 

1.2.2. Количественный анализ

Детальная информация по титрам НАа 42 положительных проб, отправленных из банка сыворотки РС УБК в Институт Пастера в Иране, показана в Таблице 1.

Коэффициент корреляции (коэффициент корреляции Пирсона ККП) между канадскими и иранскими количественными результатами составлял R = 0,96 для титров этих 42 проб (P < 0,001). Соответствующий график рассеяния, представленный в логарифмическом преобразовании log10, показан на рис. 1. Коэффициент корреляции для логарифма был подобен ранее подсчитанному из НАа титров, испытуемых с помощью АЛ в УБК с результатами, полученными путем метода анализа ЦПЭ, как проанализировано лабораторией Гроссберга для валидации

 

Таблица 1

Детальная информация по титрам НАа и логарифмам (ед.ТР/мл), с использованием анализа цитопатического эффекта в Институте Пастера в Иране и анализа люциферазы гена-репортера в центре УБК, Канада во всех 42 пробах. Коэффициент корреляции Спирмена r = 0,946, P < 0,001.

Проба

Иранские титры (ед.ТР/мл)

Титры УБК (ед.ТР/мл)

Иранский логарифм

Логарифм УБК

1.

83 977

13 523

4,924

4,131

2.

3 751

1 262

3,574

3,101

3.

4 406

916

3,644

2,962

4.

63 702

5 793

4,804

3,763

5.

16 000

8 770

4,204

3,943

6.

44 000

7 308

4,643

3,864

7.

10 572

1 664

4,024

3,221

8.

941

358

2,974

2,554

9.

94 224

3 014

4,974

3,479

10.

33 431

5 374

4,524

3,730

11.

3 192

401

3,504

2,603

12.

4 208

1 429

3,624

3,155

13.

253

113

2,403

2,053

14.

167

61

2,223

1,785

15.

13 936

2 034

4,144

3,308

16.

133 095

11 979

5,124

4,078

17.

73 141

16 726

4,864

4,223

18.

22 088

2 614

4,344

3,417

19.

2 979

1 018

3,474

3,008

20.

152

68

2,182

1,833

21.

878

200

2,943

2,301

22.

16 754

2 300

4,224

3,362

23.

210

82

2,322

1,914

24.

1 492

256

3,174

2,408

25.

17 544

2 781

4,244

3,444

 

26.

365

160

2,562

2,204

 

27.

21 093

3 976

4,324

3,599

 

28.

2 014

1 136

3,304

3,055

 

29.

55 483

6 194

4,744

3,792

 

30.

6 670

1 515

3,824

3,180

 

31.

50 601

10 159

4,704

4,007

 

32.

334

29

2,524

1,462

 

33.

21 093

3 237

4,324

3,510

 

34.

30 490

4 332

4,484

3,637

 

35.

3 500

683

3,544

2,834

 

36.

167

42

2,223

1,623

 

37.

33 431

3 694

4,524

3,567

 

38.

230

51

2,362

1,708

 

39.

3 977

872

3,600

2,941

 

40.

16 754

1 813

4,224

3,258

 

41.

20 144

4 148

4,304

3,618

 

42.

26 555

4 724

4,424

3,674

 

 


 

 

Рис. 1. График рассеяния для логарифма НАа титров, измеряемых путем метода анализа люциферазы (УБК) в сравнении с ЦПЭ (Иран). Титры выражены в логарифме log10. Коэффициент корреляции Спирмена r = 0,946, P < 0,001.

первого центра УБК. Кроме того, так как предположение нормального распределения было нарушено в непреобразованных данных, коэффициент корреляции Спирмена был подсчитан для исходных значений (r = 0,946, P < 0,001).

 

1.3. Клинический разбор

Согласно полученным результатам, мы обнаружили, что параметры, оптимизирующие чувствительность анализа и точность результатов, в Иране были рассмотрены и организованы удовлетворительно в сравнении с методами лаборатории золотого стандарта в УБК. Данное исследование помогает квалифицировать Институт Пастера в Иране, как институт, который может сгенерировать качественные результаты посредством использования анализа ЦПЭ.

Несмотря на то, что принцип измерения НАа – подобный среди различных клинических испытаний, полученные результаты варьировались от исследования к исследованию. В то время как сообщалось о том, что результаты 80 % исследуемых больных стали положительными на связывающие антитела (САа) в течение некоторого времени, САа были обнаружены у 2 % из приблизительно 50 % больных. Исследования III фазы с интерфероном бета-1а, вводимым внутримышечно, показали стабильно низкие уровни иммуногенности с частотой возникновения от 2 % до 5,8 % (Коен и соавт., 2002 г.). В исследовании «PRISM» («ПРИЗМ») 23,7 % больных, получающих 22 мкг интерферона бета-1а подкожно и 14,3 % больных, получающих 44 мкг интерферона бета-1а подкожно, имели положительные результаты испытаний на НАа (Компстон и Коулс, 2002 г.). Интересно то, что во время более раннего базового испытания фазы III интерферона бета-1а, вводимого внутримышечно, НАа были обнаружены на 52 неделе у 14 % больных, которым вводили 30 мкг интерферона бета-1а внутримышечно раз в неделю, на 78 неделе – у 21 % и на 104 неделе – у 22 % (Клане и соавт., 2002 г. Джейкобс и соавт., 2000 г.). Из указанного следует, что большинство антител к интерферону бета не препятствуют биологическому действию препарата. В нашем исследовании наличие НАа зависело от длительности терапии, с возникновением большинства положительных результатов после первых 6 месяцев лечения.

 

1.4. Вывод

В связи с тем, что в нашем исследовании были получены подобные результаты препаратов «CinnoVex» или «Avonex», мы предполагаем, что оба лекарственные средства будут иметь подобный иммуногенетический профиль.

 

Использованная литература

Антонелли Дж., Багнато Ф., Подзилли К., Симеони Е., Бастианелли С., Курренти М., Де Пиза Ф., Фиши К., Гасперини К., Салветти М., Дянзани Ф., «Развитие нейтрализующих антител у больных рецидивирующе-ремиттирующим рассеянным склерозом, которых лечили с помощью интерферона бета-1а», журнал «Interferon Cytokine Res.» («Интерферон ситокин рес.»), том 18, с. 345, 1998 г.

Боз К., Огер Дж., Гиббс Е., Гроссберг С.Е., «Пониженная эффективность долговременного лечения интерфероном бета в период рецидивов у больных рассеянным склерозом с положительным результатом на нейтрализующие антитела: канадское клиническое исследование рассеянного склероза», журнал «Mult. Scler» («Малт. склер.»), том 13, с. 1127, 2007 г.

Клане М., Раду Е.В., Каппо Л., Хартунг Х.П., Холфельд Р., Зандберг-Вольгайм М., Коойманс-Коутиньо М.Ф., Цао Е.К., Сандрок А.В., Европейские исследователи сравнительных анализов дозы интерферона бета-1а («Avonex» («Авонекс»)), «Рандомизированный, двойной слепой сравнительный анализ дозы интерферона бета-1а, еженедельно вводимого больным рецидивирующим рассеянным склерозом», журнал «Neurology» («Ньюролоджи»), том 59, с. 1507, 2002 г.

Коен Дж.А., Каттер Дж.Р., Фишер Дж.С., Гудмэн А.Д., Хайденрайх Ф.Р., Коойманс М.Ф., Сандрок А. В., Рудик Р.А., Симон Дж.Х., Симониан Н.А., Цао Е. К., Уитакер Дж.Н., исследователи «IMPACT» («ИМПЭКТ»), «Преимущества влияния интерферона бета-1а на прогрессию композитной функциональной шкалы рассеянного склероза при вторично-прогрессирующем рассеянном склерозе», журнал «Neurology», том 59, с. 679, 2002 г.

Компстон А., Коулс А., «Рассеянный склероз», журнал «Lancet» («Лансит»), том 359, с. 1221, 2002 г

Файлс Дж.Дж., Грей Дж.Л., Ду Л.Т., Фоли У.П., Гейб Дж.Д., Нестаас Е, Пунгор мл., Е. «Новый чувствительный и выборочный биоанализ для человеческого интерферона типа I», журнал «Interferon Cytokine Res.», том 18, с. 1019, 1998 г.

Гроссберг С.Е., Кавад Й., Кохасе М., Кляйн Дж.П., «Нейтрализация интерферона антителом. II. Определение единицы измерения нейтрализующего антитела и его отношение к чувствительности биоанализа: десятеричная единица уменьшения», журнал «Interferon Cytokine Res.», том 21, с. 743, 2001 г.

Джейкобс Л.Д., Кукфаир Д.Л, Рудик Р.А., Херндон Р.М., Ричерт Дж.Р., Салазар А.М., Фишер Дж.С., Гудкин Д.Е., Грэнджер К.В., Саймон Дж.Х., Алам Дж.Дж., Коан С.Л., Догерти Д.С., Кинкел Р.П., Масс М.К., Муншойер III Ф.Е., Приоре Р.Л., Пулличино П.М., Шерокман Б.Дж., Уитхэм Р.Х. и соавт., «Внутримышечный интерферон бета-1а для прогрессирования заболевания у больных рецидивирующим рассеянным склерозом: Совместная исследовательская группа рассеянного склероза (СИГРС)», журнал «Ann. Neurol.» («Энн. ньюрол.»), том 39, с. 285, 1996 г.

Джейкобс Л.Д., Бек Р.У., Саймон Дж.Х., Кинкель Р.П., Брауншидле К.М., Мюррей Т.Дж., Симониан Н.А., Сласор П.Дж., Сандрок А.У., журнал «N. Engl. J. Med.» («Н. ингл. дж. мед.»), том 343, с. 898, 2000 г.

Лэм Р. Фаррел Р., Азиз Т., Гиббс Е., Джованнони Дж., Гроссберг С., Огер Дж., «Валидизирующие параметры анализа гена-репортера люциферазы для измерения нейтрализующих антител к интерферону бета у больных рассеянным склерозом», журнал «Immunol. Methods» («Иммьюнол.месодс »), том 336, с. 113, 2008 г.

Пунгор мл. Е., Файлс Дж.Дж., Гейб Дж.Д., Ду Л.Т., Фоли У.П., Грей, Дж.Л., Нельсон Дж.У., Нестаас Е., Тайлор Дж.Л., Гроссберг С.Е. «Новый биоанализ для определения нейтрализующих антител к интерферону бета-1б», журнал «Interferon Cytokine Res.», том 18, с. 1025, 1998 г.

Шеллекенс Г., «Биоэквивалентность и иммуногенность биофармацевтических препаратов», журнал «Nat. Rev. Drug. Discov.» («Нэйч. рев. драг дискав.»), том 1, с. 457, 2002 г.

Узе Дж., Ди Марко С., Мушель-Виль Е., Моннерон Д., Банду М.Т., Хоррисбергер М.А., Доркью А., Лутфалла Дж., Могенсен К.Е., «Домены взаимодействия между альфа интерфероном и его рецепторными компонентами», журнал «Mol. Biol.» («Мол. байол.»), том 243, с. 245, 1994 г.

 


* Пишите автору по адресу: Центр исследования мозга, Университет Британской Колумбии, палата S-157, 2211 Вестбрук Молл Ванкувер, пров. Британская Колумбия, Канада V6T 2B5. Тел.: +1 604 822 7696.

Адрес эл. почты: Shahkarami@edc.mui.ac.ir (Шакарами М.А.), behrouz-vaziri@pasteur.ac.ir (Вазири Б.), Shiva.salami45@yahoo.com (Салами Ш.), ali.amini@sbmu.ac.ir (Харанди А.А.), joel.oger@ubc.ca (Огер Дж.).

 

0022-1759/$ - см. титульный лист © 2012 «Эльзевир Б.В.» Все права защищены.